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黃曲霉素m1的檢測方法是什么?高效液相色譜法的原理是什么?

2023-04-18 08:29:13 來源:汪清新聞網(wǎng)

黃曲霉毒素M1(AFM1),是一種有機化合物,化學(xué)式為C17H12O7,主要用于新陳代謝和致癌的研究。2017年10月27日,世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機構(gòu)公布的致癌物清單初步整理參考,黃曲霉毒素M1在2B類致癌物清單中。

黃曲霉素m1的檢測方法是什么?

(1)AFM1標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

用三氯甲烷配制10μg/mL的AFM1標(biāo)準(zhǔn)溶液,用紫外分光光度計在357nm波長AFM1標(biāo)準(zhǔn)溶液的準(zhǔn)確濃度(AFM1的摩爾消光系數(shù)為19950),避光4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

(2)樣品提取

液體樣品直接加入甲醇振蕩過濾得提取液,固體樣品粉碎過篩或研磨混勻后,用一定比例的甲醇水溶液振蕩過濾得提取液。提取液可以先用石油醚和氯化鈉溶液分配凈化,再用三氯甲烷轉(zhuǎn)相提取,氯化鈉溶液水洗 ,無水硫酸鈉脫水后,收集三氯甲烷層于65℃水浴通風(fēng)揮干,最后用三氯甲烷將蒸發(fā)皿中殘留物轉(zhuǎn)移至濃縮管中,減壓吹氣法將此液濃縮至一定體積后備用。

(3)點樣層析、展開、測定

各取10μL樣品用濃縮液和標(biāo)準(zhǔn)液分別點于己在105℃活化2h的硅膠G薄層板上,置于加入一定量的展開劑的展析缸中展開,橫展和縱展相結(jié)合,揮干后在紫外燈下觀察并測量Rf值(一般AFM1的Rf值為0.34),并與標(biāo)準(zhǔn)溶液的最低檢出量(0.0004μg)的熒光強度相比較,同時用硫酸溶液(1:3)顯色劑噴熒光點,進(jìn)行確證試驗,最后按樣品稱 量值、濃縮體積、總稀釋倍數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)溶液最低檢出量進(jìn)行計算。

高效液相色譜法的原理是什么?

用C18柱抽提純化樣品中的AFM1,乙醚對C18柱洗滌,再用CH2Cl2-乙醇洗脫AFM1,然后加入三氟乙酸(TFA)對AFM1進(jìn)行衍生化處理,利用液相色譜熒光檢測器檢測,并與標(biāo)準(zhǔn)AFM1-TFA的衍生物比較,進(jìn)行定、定量分析。

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